磷酸化线性多聚泛素的纯化制备开题报告

1. 本选题研究的目的及意义

泛素化修饰是细胞内一种重要的蛋白质翻译后修饰，参与调控蛋白质降解、信号转导、dna修复等多种生物学过程。

线性泛素化是一种独特的泛素化修饰类型，其特征是泛素分子之间通过首尾相连的方式形成线性多聚泛素链。

线性多聚泛素链的形成由线性泛素链组装复合体（lubac）催化，并通过招募其他蛋白质来发挥生物学功能。

2. 本选题国内外研究状况综述

线性多聚泛素化是一个相对较新的研究领域，但近年来取得了显著进展。

目前已知线性多聚泛素化参与调控多种细胞过程，并与多种疾病的发生发展密切相关。

1. 国内研究现状

3. 本选题研究的主要内容及写作提纲

本研究的主要内容包括以下几个方面:

1. 主要内容

1.构建含有磷酸化位点的线性多聚泛素表达载体，并在合适的表达体系中进行表达。

4. 研究的方法与步骤

本研究将采用分子克隆技术构建含有磷酸化位点的线性多聚泛素表达载体，并将其转化至合适的表达宿主细胞中进行诱导表达。

表达产物将通过亲和层析、离子交换层析等技术进行纯化，并利用sds-page电泳、westernblot检测等方法对纯化产物进行鉴定。

具体而言，本研究将采用以下步骤:
1.基因合成与克隆：根据目标磷酸化线性多聚泛素的氨基酸序列设计并合成相应的基因序列，将其克隆至合适的表达载体中。

5. 研究的创新点

本研究的创新点在于首次建立一种高效纯化制备磷酸化线性多聚泛素的方法，并利用该方法制备高纯度的磷酸化线性多聚泛素，为深入研究磷酸化线性多聚泛素的调控机制和生物学功能提供重要的材料基础。

具体而言，本研究的创新点包括：
1.利用基因工程技术构建含有特定磷酸化位点的线性多聚泛素表达载体，实现对磷酸化线性多聚泛素的可控表达。

2.针对磷酸化线性多聚泛素的特性，开发和优化高效的纯化方法，获得高纯度的目标蛋白，为后续研究提供材料保障。

6. 计划与进度安排

第一阶段 （2024.12~2024.1）确认选题，了解毕业论文的相关步骤。

第二阶段（2024.1~2024.2）查询阅读相关文献，列出提纲

第三阶段（2024.2~2024.3）查询资料，学习相关论文

7. 参考文献（20个中文5个英文）

[1] 刘晓敏,李晓宇,陈宇,等.基于泛素-蛋白酶体系统的抗肿瘤蛋白降解剂研究进展[j].药学进展,2023,47(01):1-12.

[2] 邓朝阳,黄丹,张宁,等.泛素特异性蛋白酶抑制剂的研究进展[j].中国药物化学杂志,2022,32(05):433-442.

[3] 张静,张贺,张健.泛素-蛋白酶体系统与心血管疾病[j].中国动脉硬化杂志,2021,29(09):879-884.