原花青素B2对心肌纤维化的影响及作用机制研究开题报告

1. 研究目的与意义

心脏纤维变性的特征是由于心脏成纤维细胞的不适当增殖，细胞外基质异常积聚导致心脏瓣膜增厚或瘢痕化，从而导致心脏形状、心室顺应性和机械功能的异常。根据定义，成纤维细胞是一组分泌胶原蛋白和其他细胞外基质成分的细胞。它们位于组织实质细胞之间的间隙。心肌成纤维细胞约占心脏细胞总数的 60%~70%，是成年哺乳动物心脏中主要的细胞类型。在正常生理条件下，这些细胞大多处于静止状态，在维持间质结缔组织和调解周围细胞之间的通讯方面发挥重要作用。在应激条件下，它们产生的细胞外基质蛋白显著增加，这是纤维化组织形成的原因。因此，许多已鉴定的成纤维细胞标志物是细胞外基质蛋白。一些由成纤维细胞高度表达的细胞外基质蛋白是纤维状胶原，如i型胶原和iii型胶原。i型胶原以具有拉伸强度的厚纤维形式存在，而iii型胶原形成比i型更易膨胀的精细网状网络。在心脏中，i型胶原和iii型胶原构成分别占心肌胶原的85%和10%。i型胶原决定心肌的硬度,而iii型胶原决定心肌的弹性，i、iii型胶原过量聚集是心脏纤维化的主要原因，可导致心肌僵硬度增加和心功能下降,最终可引发心衰。心肌纤维化是与心脏损伤和疾病相关的常见病理变化。尽管在某些情况下，胶原和其他细胞外基质蛋白的沉积可能具有一定的保护作用，但延长的纤维化通常会对心脏功能产生负面影响，并导致有害后果。抑制心脏纤维化可以改善心血管疾病尤其是心衰住院患者的预后。运用中草药治疗心肌纤维化受到广泛的关注。

[1] rockey dc, bell pd, hill ja. fibrosis—a common pathway to organ injury and failure [j]. n engl j med 2015, 372:1138-1149.

2. 研究内容和问题

原花青素是黄酮类化合物的聚合物或低聚物，广泛存在于植物和食品中，如葡萄、可可/巧克力、蓝莓和红酒中，具有抗氧化、清除自由基、抗炎、抗衰老等多种活性。

近年来，原花青素由于其广泛、有效的生理药理作用而受到了相当多的关注并成为研究热点。

原花青素b2(procyanidin b2，pb2)是原花青素的主要成分。

3. 设计方案和技术路线

小鼠背部皮下注射异丙肾上腺素(isoproterenol，ISO)，剂量为 20 mg/kg，注射21天，自由进食、给水，对照组小鼠皮下注射相同体积的生理盐水。给药和分组 小鼠随机分为 5组，即正常对照组、模型组、原花青素高、低剂量组(60，30mg/kg)、美托洛尔(60 mg/kg )。给药组小鼠连续灌胃21 d，对照组和模型组给予相同体积的生理盐水。

实验结束后检测：心脏重量/小鼠体重比；病理组织学检测；纤维化关键蛋白检测

4. 研究的条件和基础

本课题将在南通大学药学院和江苏省炎症与分子药靶重点实验室进行。

实验室设有分子生物学、蛋白工程、细胞工程、组织工程等研究室。

实验室拥有的仪器设备有：western blot 系统、实时 pcr 仪、双向电泳仪、全波长酶标仪、激光共聚焦显微镜、高速冷冻离心机、冰冻切片机、图象分析仪、真空冷冻干燥仪、化学发光检测仪等，为本研究有关项目的实施提供了保障。