不耐热肠毒素LTA36、LTA72基因的克隆、突变及表达开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

本课题的意义：

黏膜免疫是当今深受重视的一种方法，但是多数的抗原单独使用时不能有效的促进机体产生特异性抗体，因而需要强有力的佐剂的配合。大肠杆菌不耐热肠毒素（lt）是一种高效的黏膜免疫佐剂，但由于 lt 本身具有的毒副作用限制了其作为免疫佐剂在临床上的应用。lt 的突变改造是目前一种常用手段，可在消除副作用的同时尽量保留免疫调节作用。

研究概况：

2. 研究的基本内容和问题

研究目标：利用引物突变lt基因并成功表达蛋白

研究内容：1、lta基因的克隆2、lta基因连接t载体并测序 3、设计引物突变lta为lta63 lta72 4、插入到表达载体并鉴定 5、表达并鉴定蛋白

拟解决的关键问题：引物的设计、重组质粒的构建、阳性重组菌的筛选、阳性重组菌的lt产率过低等

3. 研究的方法与方案

研究方法：细菌基因组的提取、pcr、核酸凝胶电泳、胶回收、质粒提取等。

技术路线：

1.lta基因组的扩增与突变

4. 研究创新点

设计了新的引物以解决产率过低的问题

5. 研究计划与进展

第一阶段：2015.9-2015.10 熟悉实验室操作、论文选题

第二阶段：2015.10-2015.11 查询参考文献

第三阶段：2015.11-2015.12 完成表达载体的构建