猪场圆环病毒分子流行病学调查开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

猪圆环病毒（porcinecircovirus，pcv）属圆环病毒科圆环病毒属，是已知的最小的动物病毒之一[1]。

病毒粒子直径14－17nm，呈20面体对称结构，含有共价闭合的单股环状负链dna，基因组大小约为1.76kb[2]。

pcv对外界理化因子的抵抗力相当强，即便在ph3的酸性环境及72℃的高温环境中也能存活一段时间，氯仿作用不失活，无血凝活性[3]。

2. 研究的基本内容和问题

研究目标：通过对2-3个大规模猪场的不同生长阶段的健康猪圆环病毒带毒情况的调查，分析出该病毒的流行情况和流行特点，提出该病的预防建议。

研究内容：首先对2-3个大规模猪场的不同生长阶段（主要有哺育期、保育期育肥期和种母猪）的健康猪进行鼻拭子采样，然后将鼻拭子放入1.5ml的eppendorf 管（以下简称ep管）,再往ep管加入2ml无菌生理盐水放入4℃冰箱培养过夜，然后对培养液进行病毒dna提取，直接采用试剂盒（本实验室主要使用柱式病毒dnaout试剂盒，由北京天恩泽基因科技有限公司研发提供）将病毒的dna模板提取出来。

然后通过pcr对模板基因进行扩增，然后通过电泳对pcr产物进行鉴定，找出阳性模板，进一步重复上述步骤进行确定，若仍然显示为阳性，则对该电泳凝胶中对应的阳性模板片段进行回收（本实验主要axyprep dna凝胶回收试剂盒，由康宁生命科学（吴江）有限公司生产）。

3. 研究的方法与方案

研究方法：1、 病毒dna的提取（采用柱式dnaout试剂盒）2、 pcr体外基因扩增技术3、 电泳凝胶回收（采用axyprep dna凝胶回收试剂盒）4、 基因测序实验方案：鼻拭子采集→病毒基因模板制备→pcr鉴定→电泳→阳性模板凝胶回收→回收产物转换、链接→基因片段测序可行性分析：1、 病毒基因模板制备采用目前市面上销售的专用试剂盒，完全可行。

2、 pcr技术目前该技术十分成熟，实验室拥有一套完整的pcr仪器，完全可行。

3、 电泳技术目前该技术十分成熟普遍，实验室拥有一套完整的电泳仪，完全可行。

4. 研究创新点

特色和创新之处：对多个猪场的健康猪进行采样分析，每次采样涉及的猪群较广，包括了哺乳期（20日龄）、保育期（40日龄和60日龄）、育肥期（120日龄）和种母猪，每次采样数量多达100个，具有普遍性，得出的结论具有说服力。

5. 研究计划与进展

2015.3-4月：对三个大型猪场进行采样，每个猪场按不同日龄分别采20个样，一共300个样。

对样品进行dna模板提取。

pcr检测选出阳性模板。