1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
无乳链球菌（streptococcus agalactiae），亦称为b族链球菌（group b streptococcus, gbs），是一种人-畜-鱼共患的病原菌，能够引起新生儿败血症、脑膜炎、肺炎，奶牛乳腺炎，鱼类脑膜炎，感染宿主范围广泛[1-3]。近年来，无乳链球菌已成为世界性、多地区、多个鱼类品种的主要病原菌。其中，我国淡水养殖的主要鱼种之一罗非鱼，自2009年来不断发生大规模的链球菌疫情，给我国的水产养殖业带来了巨大的经济损失[4,5]。研究发现，鱼源无乳链球菌致病性和传染性极强，对鱼类的致死率可达100%，但其致病机制仍不甚清晰[6]。
苯甲酰甘氨酸氨基水解酶（benzoylglycine amidohydrolase），亦称为马尿酸酶（hippuricase, hip），属于锌金属肽酶超家族，m20d家族。苯甲酰甘氨酸氨基水解酶能够将n-苯甲酰甘氨酸分解为苯甲酸和甘氨酸[7]。目前，苯甲酰甘氨酸氨基水解酶在无乳链球菌致病过程中所发挥的作用尚未明确，亟待研究。
本试验研究的hipo基因是本实验室郭长明博士[8]通过scots方法筛选到的无乳链球菌gd201008-001株在巨噬细胞内存活过程中表达上调的基因。本试验通过对无乳链球菌的苯甲酰甘氨酸氨基水解酶进行克隆表达，并免疫家兔制备多克隆抗体，为后续研究苯甲酰甘氨酸氨基水解酶的特性及其在无乳链球菌致病过程中的作用奠定了基础。
2. 研究的基本内容和问题
1. 研究目标
克隆表达苯甲酰甘氨酸氨基水解酶，并制备相应抗体，为后续研究苯甲酰甘氨酸氨基水解酶的生物学特性及其致病作用进行了铺垫。
2. 研究内容
3. 研究的方法与方案
1. 研究方法及方案
1.1 设计引物，以无乳链球菌gd201008-001株全菌基因组为模板通过pcr扩增产物得到目的基因hipo，双酶切后分别连接到pet28a( )和pet32a( )表达载体中，分别将重组表达质粒热激转化到大肠杆菌bl21(de3)感受态细胞中，再挑取阳性克隆进行pcr和测序鉴定。
1.2 重组蛋白进行诱导表达，鉴定其表达是在上清还是包涵体，之后在进行蛋白纯化。
4. 研究创新点
无乳链球菌能够引起新生儿败血症、脑膜炎、肺炎，奶牛乳腺炎，鱼类脑膜炎，是一种人-畜-鱼共患的病原菌，曾在我国引发大规模罗非鱼流行性疾病，造成了水产养殖业的巨大经济损失。鱼源无乳链球菌致病性和传染性极强，对鱼类的致死率可达100%，但其致病机制仍不清楚。本实验室郭长明博士通过SCOTS方法筛选发现，无乳链球菌GD201008-001株在巨噬细胞内存活过程中hipO基因表达上调，提示苯甲酰甘氨酸氨基水解酶可能在无乳链球菌与宿主之间的互作中起着重要作用。目前关于苯甲酰甘氨酸氨基水解酶的研究极少，本试验通过对无乳链球菌的苯甲酰甘氨酸氨基水解酶进行克隆表达，并进行相应的抗体制备，为后续研究苯甲酰甘氨酸氨基水解酶的特性及其在无乳链球菌的致病作用中所扮演的角色做了铺垫。
5. 研究计划与进展
2015年03月-2015年03月中旬目的基因hipo的扩增、重组质粒的构建
2015年03月中旬-2015年04月上旬 重组蛋白的诱导表达及纯化
2015年04月上旬-2015年05月上旬 纯化的蛋白免疫家兔，获取相应抗体
课题毕业论文、文献综述、任务书、外文翻译、程序设计、图纸设计等资料可联系客服协助查找。
