猪源Ptx3蛋白真核表达体系的构建及其抗菌作用研究开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

猪链球菌(ss)是一种重要的人畜共患病病原体，不仅可引起败血症，也可侵害中枢神经系统和其他组织,引发脑膜炎、肺炎、心内膜炎和关节炎等严重的炎性反应[1,2]。

近10年来，我国至少有237人感染猪链球菌，导致53人死亡，给公共卫生带来了严重的威胁，备受世界关注[3,4]。

然而对于猪链球菌病我们常采用抗生素治疗的方法，不仅会增强猪链球菌的耐药性[5-7]，而且大量使用抗生素也会引起药物残留，食品安全等一系列的问题，所以需要一种新的、更安全有效的猪链球菌病治疗办法。

2. 研究的基本内容和问题

一、研究目标： 提取猪源ptx3蛋白的pvax质粒免疫4-5窝仔猪（约50头），对其发病率，血液指标等进行收集以检测其临床抗菌作用；对ptx3进行原核表达，以及构建ptx3真核表达体系，研究ptx3蛋白对猪链球菌病的免疫效果。

二、研究内容：1、提取约50头量的猪源ptx3蛋白的pvax质粒，进行一免及二免。

2、原核表达ptx3，对其蛋白进行研究。

3. 研究的方法与方案

一、研究方法：重组载体的构建、试剂盒提取质粒、真核表达。

二、技术路线和实验方案：1、提取约50头量的猪源ptx3蛋白的pvax质粒，进行一免及二免。

2、原核表达ptx3，对其蛋白进行研究。

4. 研究创新点

猪链球菌病常采用抗生素治疗的方法,不仅会增强猪链球菌的耐药性，而且大量使用抗生素也会引起药物残留,食品安全等一系列的问题,所以需要一种新的、更安全有效的猪链球菌病治疗办法。

Ptx3蛋白是第一个被确认的长正五聚蛋白，与经典的短正五聚蛋白C反应蛋白和血清淀粉样蛋白P复合物同属于可溶性识别受体(PRMs)在细菌性成分、IL-1、TNF-a等炎性介质的刺激作用下,单核巨噬细胞、内皮样细胞、平滑肌细胞、滑膜细胞等多种细胞都可快速的产生Ptx3蛋白而对机体进行免疫保护。

5. 研究计划与进展

2013.3.10---2013.3.24：试剂盒大提质粒，准备一免4-5窝仔猪的剂量；2013.3.24---2013.4.25:原核表达ptx3及二免的质粒准备；2013.4.25---2013.5.10:真核表达载体的构建。