猪链球菌小RNA rss28编码小肽的鉴定开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

猪链球菌（streptococcus suis）是一种革兰氏阳性菌，一般分为33个血清型，其中2型分离率最高，致病性也最强，可以引起猪的急性败血症、脑膜炎、关节炎及急性死亡，也可导致生猪从业人员感染和死亡，是一种重要的人畜共患病原菌^[1,2]。为了引起感染，ss对毒力因子的表达进行着精细的调控。最近研究表明，细菌小rna（small rna，srna）可作为细菌毒力调控关键因子^[3-5]。细菌srna常见的作用方式是与靶位基因mrna结合，抑制靶位mrna翻译或同时影响靶位mrna稳定性导致其降解，大部分这类srna通常不编码蛋白质，称为核糖核酸调节子（riboregulator）^[3,6,7]。然而，最近文献表明，细菌小rna不仅可以作为核糖核酸调节子参与基因调控，还可以编码多肽，行使双功能^[8]。

指导教师前期从猪链球菌2型毒力株p1/7中发现29个srna，其中rss28等4个预测可编码蛋白，且rss28在猪血液中上调表达，提示可能参与毒力调控^[9]。因此，本课题在已有研究基础上，应用绿色荧光蛋白（gfp）融合与碱基定点缺失突变技术^[10]探讨rss28是否编码多肽的可能性并确定其翻译起始位点，为阐明rss28在猪链球菌毒力调控中的作用奠定基础。

参考文献

2. 研究的基本内容和问题

1.研究目标

1.1探讨rss28编码多肽的可能性；

1.2应用gfp融合及碱基定点缺失突变技术，确定rss28编码多肽的翻译起始位点。

3. 研究的方法与方案

1.研究方法

1.1构建 rss28::gfp融合重组质粒

1.1.1引物设计：引物a与b用于扩增rss28片段，引物c与d用于扩增gfp基因。引物a与d 5'端分别添加酶切位点psti与bamhi，引物c 5'端需要添加引物b的反向互补序列，以便rss28和gfp片段融合。

4. 研究创新点

最近文献表明，有些细菌小RNA不仅可以作为核糖核酸调节子参与基因调控，还可以编码蛋白质，行使双功能。

本课题将绿色荧光蛋白融合与碱基定点缺失技术相结合，探讨猪链球菌小RNA rss28编码多肽的可能性，并确定其翻译起始位点，研究内容具有新意。

5. 研究计划与进展

1.研究计划

2015年3月-2015年4月：构建 rss28::gfp融合重组质粒，并通过western blot检测 rss28::gfp融合蛋白；

2015年4月-2015年5月：构建rss28::gfp-m1和rss28::gfp-m2、rss28::gfp-m3碱基缺失突变质粒，通过western blot确定翻译起始位点。