克氏螯虾血细胞的形态观察与分析开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

近年来，随着市场需求量的增大，我国螯虾（淡水龙虾）养殖规模逐步扩大，但随之而来的虾病却给虾类的养殖业带来严重损失。

血细胞是虾类免疫系统的重要组成部分，在体液免疫和细胞免疫中均起着至关重要的作用。

研究发现,在虾免疫反应中血细胞主要参与四个防御过程血液凝结、吞噬作用、包囊作用及结节形成、伤口修复。

2. 研究的基本内容和问题

本文通过普通光镜观察虾类新鲜状态下血细胞的变形情况，以及光镜瑞氏染色观察血涂片效果，以观察血细胞的形态特征(胞质中颗粒的大小)和染色特点(胞质颗粒、细胞核和细胞质的着色情况)，计算血细胞在血液中所占的比例等作为判断标准来对螯虾的血细胞进行分类。

光镜染色观察操作简便、快捷，能直观地反应血细胞的形态，但是由于目前研究者采用不同的染液和染色方法对血细胞进行染色，对染色结果的解读与分析各不相同，因此光镜染色结果还存在争议。

所以用激光扫描共聚焦显微镜观察虾类的血细胞，可以与光镜观察结果相互印证，验证其观察结果。

3. 研究的方法与方案

1. 活细胞变化观察用1ml一次性注射器从螯虾背侧的头胸甲与腹甲之间的软皮中，插入围心腔，直接吸取0.1ml的螯虾血液至载玻片，然后迅速加盖盖玻片，在40光镜或油镜下观察并拍照螯虾血细胞在新鲜状态下的变化，实验共用螯虾10尾 。

2. 光镜染色观察首先用1ml一次性注射器吸取0.1ml，10甲醛固定液，再插入螯虾的围心腔吸取等量的螯虾血液，使螯虾血细胞可在注射器内固定，并迅速制成血涂片[2]。

实验共用螯虾5尾，每只虾血涂片制2张。

4. 研究创新点

相对而言，激光扫描共聚焦显微镜其在水产动物的应用中仍较少。

激光扫描共聚焦显微镜可以处理活的标本，不会对标本造成物理化学特性的破坏，更接近细胞生活状态参数测定。

激光扫描共聚焦显微镜有效地排除了非焦平面信息，提高了分辨率及对比度，使图像更为精确清晰。

5. 研究计划与进展

2015.3.2-3.20：熟悉实验室器材，查看相关文献，确定选题与开题报告。

2015.3.20-4.6：根据实验设计，在光镜下观察螯虾血细胞在新鲜状态下的变化，以及制作螯虾血涂片后瑞氏染色观察，完成毕业实习和毕业论文中期考核。

2015.4.6-5.20：继续进行毕业设计实验操作，利用激光扫描共聚焦显微镜观察螯虾的血细胞，完成毕业论文。