PCV2 rep基因启动子区类Sp1位点的生物学功能研究开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

猪圆环病毒2型（pcinecircovirustype2,pcv2）是猪圆环病毒相关性系统疾病（pcv2-systemicdisease,pcv2-sd）的主要病原，它不但可以引起断奶仔猪发生衰竭、死亡，而且还与仔猪a2型先天性震颤（congentialtremtypeaii,ct）、怀孕母猪流产(reproductivefailure)、成年猪皮炎肾炎综合征（pcinedermatitisnephropathy,pdns）和呼吸道疾病综合征（pcinerespiratydiseasesyndrome,prds）有关。这些疾病的广泛流行严重影响养猪业，给很多国家和地区带来巨大的损失，更为严重的是pcv2的感染可以造成免疫抑制，引起其他各种病原的继发感染[1]。pcv2已经成为严重阻碍养猪业发展的主要病原之一。pcv2基因组有11个开放性阅读框（openreadingframe,orf），orf1是pcv2基因组中最大的一个阅读框[2]，编码病毒复制相关蛋白(rep)，与病毒的复制转录有关，也称为rep基因。rep在所有圆环病毒中高度保守，orf1编码的rep以及rep蛋白对病毒的复制至关重要，突变可能导致病毒不能复制[3]。rep基因能启动病毒基因组的滚环复制，具有便于dntp结合的p-loop结构[4]以及螺旋状的复制起点[5]，与病毒复制密切相关[6,7]。

spl蛋白(specificitypmtein1)是第一个为人类所识别与克隆的转录因子，该蛋白分布广泛，具有与特定序列dna结合并对多种基因进行激活的功能，它识别的dna核心结合序列为ggcgggg[8]。spl蛋白的c端区域含有3个连续的锌指结构域，这一区域能够特异性地识别并结合gcrich的启动子区域，从而调节基因的转录。pcv不编码dna聚合酶，主要依赖细胞有丝分裂s期表达的蛋白和酶类进行滚环方式复制[9]。miller-jensenk等[10]研究显示，宿主sp1蛋白结构的突变会引起hiv-1基因表达的变化，说明hiv-1基因组中存在转录因子sp1的结合位点或与结合位点具有类似功能的类似序列（类sp1位点）。因此本实验猜测pcv2rep基因启动子区可能存在转录因子类sp1位点能够结合宿主系统的sp蛋白，促进病毒基因的转录并进而促进自身增殖。

参考文献：

2. 研究的基本内容和问题

研究目标

pcv2rep基因启动子区类sp1位点的生物学功能

研究内容

3. 研究的方法与方案

实验方案

1.pcv2rep基因启动子区类sp1位点对启动子活性的影响

1.1.1病毒基因组的提取

4. 研究创新点

PCV2rep基因是病毒复制酶的编码基因，软件分析发现在其启动子区存在类Sp1位点，本研究构建了类Sp1位点突变的rep基因启动子测试载体，利用感染性克隆技术构建了PCV2类Sp1位点突变毒株，通过研究此位点对rep基因启动子活性及病毒复制效率的影响两方面探索此类Sp1位点是否具有生物学功能。

5. 研究计划与进展

3月份开始进实验室熟悉实验室及常规实验室操作和仪器使用；4月份开始正式实验，预计5月20号左右可以完成所有实验项目，之后进行实验材料与数据的整理及准备撰写毕业论文。