Carba NP法用于产碳青酶烯酶不动杆菌的检测开题报告

 2023-02-09 06:02

1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)

国内:比较少,能查阅的有一篇国际检验医学杂志

袁敏,龚娜,陈霞,等.carba np法用于产碳青霉烯酶菌株快速检测的研究[j].国际检验医学杂志,2013,34(23):3105-3109.

国外:从2012年开始100多篇文献

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2. 研究的基本内容和问题

目前检测菌株是否产碳青霉烯酶的方法主要有美国临床实验室标准化协会(clsi)推荐的

1、改良hodge试验
2、专门针对b组碳青霉烯酶的亚胺培南-edta双纸片协同试验
3、商品化的etest mbl确认试条
本研究的 carba np法直接采用细菌细胞裂解后的蛋白抽提液(酶粗提物)与亚胺培南进行反应,碳青霉烯酶能水解碳青酶烯类药物,使其开环,开环的同时伴随h 的产生,当h 累计到一定浓度,可使检测液中的酸碱指示剂(酚红)变色,用肉眼即可辨别此颜色变化,从而推测菌株是否产碳青酶烯酶。

carba np试验分carba np试验i和carba np试验ii,
carba np试验i结果可判断菌株是否产碳青霉烯酶,
carbanp试验Ⅱ根据不同组别酶抑制剂的不同,在carba np试验i的基础上增设2个检测孔,以进一步判定产碳青酶烯酶菌株的组别。

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3. 研究的方法与方案

实验准备
1.1主要试剂与耗材
亚胺培南西司他丁钠(杭州默沙东制药有限公司)、 他唑巴坦(中国药品生物制品检定研究院)、0.5(mol/l)edta(上海生工生物工程有限公司)、细菌总蛋白抽提试剂(thermo公司)、酚红(amresco公司)、硫酸锌七水合物(美国sigma公司)。

主要耗材为96孔细胞培养板(美国corning公司)。

1.2检测液成分
检测液a:
每毫升0.5%酚红溶液(ph7.0~7.8)中含有终浓度为8mg/ml的亚胺培南/西司他丁钠,0.1 mmol/l znso4 。

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4. 研究创新点

carba np试验最大的优势在于分离到菌株后1 h内便可以判定菌株是否产酶,用药敏板测定药敏,以及用改良hodge试验均需要额外16~18h才能初步判断耐药性及产酶情况。

而carba np实验快速方便,不需要昂贵试剂,且有很高的敏感性和特异性。

适合在临床微生物学实验室、医院感染控制室及疾病预防控制系统各单位普及应用。

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5. 研究计划与进展

3月份确立实验方案,设想实验过程中遇到的问题,寻找解决措施,以确保实验顺利行下去;准备实验试剂、实验耗材、标准菌种,收集特殊典型菌种。

4月份开始实验,从传统的改良hodge试验开始,与本研究形成对比,在实验过程中收集遇到的问题,通过查阅文献得到解决,并做总结,为写论文做准备,立下依据。

5月份开始准备写论文。

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