南京市奶牛场大肠杆菌0157：H7流行病学调查及菌株分离开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

肠出血性大肠杆菌(enterohemorrhagicescherichiacoli,ehec)是一种重要的人兽共患食源性病原菌，感染后可引起出血性肠炎(hemorrhagiccolitis,hc)、溶血性尿毒综合征(hemolyticuremicsyndrome,hus)、血小板减少性紫癜(thromboticthrombocytope-nicpurpura,ttp)等，且病死率高[1]。eheco157:h7是其主要的血清型，自美国1982年首次爆发流行以来，世界上许多国家均相继发生了eheco157∶h7的感染流行，发病较多的国家主要有美国、加拿大和日本等，而中国自1986年首次报告o157∶h7感染的病例以来，已先后有江苏、山东、河南、安徽、北京等十几个省市发现o157∶h7感染的散发病例，潜在着疫情爆发流行的威胁，仅在1999年江苏省徐州局部地区短期内就报告了131例o157感染性腹泻病例，其中仅有16例治愈，115例因并发急性肾衰而死亡[2]。由于eheco157∶h7感染具世界流行性、高发病率与病死率以及抗生素治疗会加剧病情等特点，已成为一个全球性的公共卫生问题，受到世界各国广泛关注。

eheco157∶h7为需氧或兼性厌氧、革兰氏阴性，有周鞭毛，并有菌毛，不产生芽孢，发酵乳糖，不发酵或迟缓发酵山梨醇，氧化酶阴性，β-葡萄糖苷酶阴性的杆菌[3]。o157∶h7感染是一种食源性疾病，其贮存宿主主要是牛，其他的反刍动物以及家畜、家禽等都为潜在的宿主。o157∶h7能够长期寄居在健康携带者和牛、羊等动物的肠道中，因此无症状的带菌者和动物都有可能成为传染源[4]。

目前，对其检测方法主要有传统的分离培养，免疫学方法以及分子生物学方法。传统的分离培养包括山梨醇麦康凯琼脂(smac)平板法、科玛嘉(chromagar)显色琼脂平板法、4-甲基伞形酮-β-d葡萄糖醛酸苷(mug)试验等；免疫学方法则有直接免疫荧光(ifa)法、酶联免疫吸附试验(elisa)、免疫磁性分离(ims)、乳胶凝集试验等；而分子生物学方法有限制性片段长度多态性(restrictionfragmentlengthpolymorphism,rflp)、随机扩增多态性dna(randomamplifiedpobmorphicdna,rapd)、脉冲场凝胶电泳(pulsedfieldgelelectrophoresis,pfge)、随机片段长度多态性(amplifiedfragmentlengthpolymorphism,aflp)、多位点可变数衔接重复序列分析、基因芯片、聚合酶链反应(polymerasechainreaction,pcr)等[5]。各种方法均有其优缺点，在检测和鉴定方面起着异常重要的作用，采用多种方法联合应用能快速准确判断，为追踪传染原、确定传播途径等提供有价值的流行病学依据。

2. 研究的基本内容和问题

研究的目标

了解南京市奶牛场携带大肠杆菌o157:h7的情况，并分离eheco157∶h7。

研究内容

3. 研究的方法与方案

研究方法

本研究采用选择性培养基筛选、pcr和血清学试验、生化实验等多种方法分离鉴定eheco157:h7。

技术路线

4. 研究创新点

本研究将从南京市多家奶牛场采集大量样品，采用选择性培养基筛选、PCR和血清学试验、生化实验等多种方法联合应用分离鉴定大肠杆菌O157:H7，以了解大肠杆菌O157:H7在南京奶牛场的流行情况，具有重要的公共卫生意义。

5. 研究计划与进展

1．3月上旬，熟悉实验室环境，学习常用的分子生物学技术；

2．3月中旬，定题，完成成开题报告，学习流行病学调查以及病原分离鉴定的步骤方法，并查阅相关资料，进行试验理论、技术和条件等各方面的准备；

3．3月下旬至5月中旬，正式进行试验，采集样品，并对样品进行分离鉴定；