Surfactin对DC作用的初探开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

本课题的意义：通过初步探明surfactin对dc的作用，从而推断其对机体免疫功能的作用，可将surfactin应用于免疫领域。

国内外研究概况：国内外研究表明，surfactin一方面可以促进真菌凋亡，另一方面可以作为免疫佐剂，通过肌肉、皮下、口服等免疫途径来增强机体的免疫应答，从而治疗如i型糖尿病等的免疫疾病。

应用前景：surfactin作为一种表面活性肽，可以有效降低表面张力，是少数商业化应用的生物表面活性剂。

2. 研究的基本内容和问题

研究目标：初步探明surfactin对dc的作用，包括对dc表型变化、形态变化、功能成熟的影响以及作用机理等。

研究内容：1. surfactin对dc 安全使用剂量的确定；2. surfactin对dc表型的影响；3. surfactin对dc形态的影响；4. surfactin对dc功能的影响；5. surfactin对dc作用机理的初步探究。

拟解决的关键问题：surfactin是否能促进dc的成熟从而增强机体的免疫作用？

3. 研究的方法与方案

研究方法：1. 分离小鼠骨髓源dc，用不同浓度梯度的surfactin作用dc，流式测细胞凋亡，选定安全剂量的surfactin；2. 用安全剂量的surfactin作用dc，流式测定dc的表型；3. 用安全剂量的surfactin作用dc，显微镜观察dc的形态；4. 用安全剂量的surfactin作用dc后，再进行混合淋巴细胞反应，流式测定t细胞增殖情况；5. 用安全剂量的surfactin作用dc，western-blot测定dc的信号通路的关键蛋白。

技术路线：（请参见附件）实验方案：1. 购买四周龄c57公鼠，适应饲养一周后处死，取股骨和胫骨，分离出骨髓干细胞，培养成dc；2. 用不同浓度梯度（如稀释104、105、106倍等）的surfactin作用dc，流式测细胞凋亡，选定安全剂量的surfactin；3. 用安全剂量的surfactin作用dc，流式测定dc的表型（cd80、cd86、cd40、mhcⅡ）；4. 用安全剂量的surfactin作用dc，显微镜观察dc的形态，测量树突的长度和宽度，计算其比值（shape index）；5. 用安全剂量的surfactin作用dc后，再加入小鼠t细胞，进行混合淋巴细胞反应，流式测定t细胞增殖情况；6. 用western-blot测定dc信号通路（mapk信号通路）的关键蛋白。

可行性分析：1. 本实验室已拥有提取制备好的surfactin，便于进行后续试验；2. 本实验室成员长期从事免疫相关研究，具备基本的试验设备和试验经验；3. 本人主持过srt项目，具备一定的试验操作能力和学习能力。

4. 研究创新点

目前尚未有人发表过有关surfactin对DC作用的相关文献。

本次试验开创性地将surfactin作用DC，通过研究surfactin对DC表型、形态、功能成熟等方面的影响，并且初探其作用机理，试图初步得出surfactin对DC的作用，从而推断其对机体免疫功能的作用，实属一大创新之处。

5. 研究计划与进展

研究计划：2015.3.1-2015.3.16查阅相关文献，熟悉试验操作方法；撰写开题报告。

2015.3.17-2015.3.26 确定surfactin作用dc的安全使用剂量。

2015.3.27-2015.4.6surfactin对dc表型和形态影响的试验；撰写中期考核报告。