用HI方法和ELISA方法对兔出血症基因工程疫苗兔体进行检测开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

1、课题意义应用hi方法及elisa对免疫周期内家兔免疫状况进行监测：于免疫后不同时间（7、14、21、28天，1、2、3、4、5、6、7、8、9个月）分别采集血清样品，对家兔免疫状况进行监测，了解家兔体液免疫状况。

旨在为检测兔出血症病毒（rhdv）抗体提供一种特异、敏感、快速、操作简便、经济的检测方法，进而为兔出血症预防控制和免疫检测等提供科学的技术手段。

2、背景及可行性分析 兔出血症是由兔出血症病毒（rhdv）引起的兔的一种急性、败血性、烈性传染病，以呼吸系统出血、肝坏死及实质脏器水肿、淤血及出血性变化为主要特征。

2. 研究的基本内容和问题

、研究的目标、内容和拟解决的关键问题用抗体间接elisa方法和修订的hi方法对家兔免疫状况进行监测，对兔场对家兔免疫水平进行了解和掌握。

使用研制的疫苗接种不同日龄、不同用途的所有家兔，对其免疫效力进行评价。

拟解决对关键问题：用两种方法对大量的实验样本血清进行检测，与攻毒方法的结果进行比较，分析血清效价与攻毒结果的平行性关系。

3. 研究的方法与方案

研究方法、技术路线、实验方案及可行性分析研究方法和技术路线：用疫苗给家兔进行免疫-----不同时间点采集血液，分离血清----用两种方法进行检测---与攻毒方法的结果进行比较，分析结果。

由于本研究室长期从事兔出血症的研究工作，血液样本来源广、数量多，而且本研究室进行兔出血症疫苗研制时需要对兔出血症疫苗免疫抗体进行检测，需要长期运用这种试验方法，同时研究室有酶联免疫检测仪等仪器，完全可以保障试验的顺利进行。

同时，实验室前期工作已成功建立检测兔出血症病毒抗体elisa的方法，并发表于《江苏农业学报》。

4. 研究创新点

特色或创新之处 兔出血症病毒间接ELISA方法的建立可有效克服血凝抑制方法的缺陷，可用于规模化养兔场兔群抗体水平的监测，对指导该病的防控及流行病学调查至关重要，具有重要的临床意义。

本项目通过分子生物学技术，利用杆状病毒表达系统在昆虫细胞中表达兔出血症病毒衣壳蛋白VP60，该蛋白可以在体外装配成类似天然病毒一样的病毒样颗粒（VLPS），内部不含有病毒核酸，具有与天然RHDV一样优良的抗原性，不存在RHDV潜在散毒的危险；重组VP60衣壳蛋白抗原稳定性好，长期保存效价变化小，以此蛋白作为兔出血症血凝抑制试验的四单位病毒的抗原，对结果的判定及标准的执行极其有利

5. 研究计划与进展

研究计划及预期进展首先熟练掌握hi及elisa的实验原理方法和步骤，然后对免疫周期内对家兔进行免疫检测，了解家兔免疫水平情况。

预期进展：3月10日至3月28日，学习并熟练掌握hi及elisa的实验原理方法和步骤。

3月30日至4月24日，用hi方法检测血清样本。