不同处死方法对C57BL/6J小鼠超排卵子质量的影响开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

意义：随着生命科学研究的日益发展，实验动物的研究科学也在我国逐步得到重视，实验动物的使用量也逐渐增加，实验动物相关标准化操作，特别是动物福利相关，要符合国际惯例，得到国内外实验动物使用者的认可。

小鼠作为应用最为广泛的实验动物之一，其实验研究的应用尤为多，因此得到广大动物福利研究人员的关注。

c57bl/6j品系小鼠是近年来基因工程应用最广泛的一种近交系小鼠，其遗传背景稳定详细，繁育方式容易操作，c57bl/6j品系小鼠的繁育工作就尤为重要。

2. 研究的基本内容和问题

目标和内容：收集采用不同方法处死c57bl/6j雌鼠的卵子，培育后进行体外受精实验（ivf），通过生仔率得出不同的处死方式对c57bl/6j雌鼠的影响。

关键问题：完全熟悉并掌握整个实验操作原理和流程。

熟练掌握c57bl/6j小鼠卵子的超排方法，雌鼠卵子的采集和培育，雄鼠精子的采集，以及小鼠体外受精的实验操作技术。

3. 研究的方法与方案

研究方法：通过查看不同方式处死的c57bl/6j雌鼠的卵子活力，并进行大量的体外受精实验验证得到后代小鼠的数量，比较后期的体外受精率和移植生仔率的情况，判断不同的处死方式对雌鼠卵子质量的影响。

技术路线：实验动物分组（脱颈椎、麻醉、二氧化碳窒息三种方法处死）→雌雄鼠实验前准备（雌鼠超排、雄鼠试配、假孕受体母鼠）→卵子精子的采集和培育→显微镜体外受精操作（ivf）→培育24h（观察二倍体细胞数、单细胞数和畸形数）→假孕母鼠胚胎移植（记录移植数量）→移植后2周观察是否怀孕→21天观察小鼠出生情况并记录（小鼠出生数量、存活数、出生率）实验方案：1. 实验动物的分组1) 脱颈处死：5只雌鼠一组； 2) avertin麻醉剂腹腔注射处死： 5只雌鼠一组； 3) co2窒息法处死： 5只雌鼠一组以上实验分组均为每进行一次实验的每组雌鼠数量。

后期大量验证实验均依此分组进行。

4. 研究创新点

目前国内外尚未有专门针对不同的处死方式对小鼠的卵子质量及后期体外受精效果影响的研究。

本次研究主要依靠大量的显微操作，这对今后从事科研工作有非常大的帮助。

5. 研究计划与进展

研究计划：1. 1月12日-3月2日：实验准备工作，大量练习卵子和精子的采集方法以及ivf的实验规范操作，熟练掌握显微操作技术，减少实验人员对实验结果的影响。

2. 3月2日-4月30日：进行大量实验操作，至少采集15组实验数据，并记录。

3. 5月1日-5月20日：实验数据的分析处理，写实验报告。