和缓艾美耳球虫三种重组蛋白的免疫保护性研究开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

1.本课题的意义

鸡球虫病是一种由孢子虫纲艾美耳属球虫引起的危害养鸡业的重要疾病，全球家禽业每年因球虫病损失高达20亿^[1]。常见的鸡球虫有七个种，包括柔嫩艾美耳球虫（eimeria tenella）、毒害艾美耳球虫（e. necatrix）、堆型艾美耳球虫（e. acervulina）、巨型艾美耳球虫（e. maxima）、布氏艾美耳球虫（e. brunetti）、和缓艾美耳球虫（e. mitis）和早熟艾美耳球虫（e. praecox）。其中，和缓艾美耳球虫致病力较弱，低剂量卵囊感染一般不引起可见病变^[2]。大剂量感染会表现出生长缓慢,产蛋减少,角质鳞片区黄色素减少，肠表面苍白，小肠肠壁变薄，肠内容物稀薄等病变^[3]。在江苏地区，和缓艾美耳球虫的感染率为50. 0%，具有潜在威胁性，对其的预防是不容缓^[4]。

长期以来，鸡球虫病主要依靠药物进行预防，但长时间使用抗虫药会使鸡球虫产生耐药性并且还会有药物残留问题。近来的研究表明通过接种抗球虫病的重组抗原或dna疫苗且用细胞因子作为传送佐剂可以提高dna疫苗重组抗原诱导广泛、持久的体液和细胞免疫的潜力^[5-6]。

2. 研究的基本内容和问题

1.研究目标

（1）通过用三种重组蛋白给雏鸡进行免疫，观察疫苗的免疫保护性；

（2）通过分析免疫保护性实验结果，探究每种蛋白的免疫效果，为制造最佳的和缓艾美耳球虫疫苗提供线索。

3. 研究的方法与方案

1.研究方法

（1）收集归纳总结相关文献资料，了解研究现状，找出可能的问题并寻找解决方案。

（2）进行蛋白表达和纯化。

（3）对雏鸡进行分组后进行免疫。

（4）对雏鸡进行攻虫。

（5）剖杀，收集鸡粪便和血清。

（6）分析疫苗的免疫保护性。

2.技术路线

3.实验方案

（1）将1A蛋白、过氧化物酶（PRX）和肌动蛋白解聚因子蛋白进行表达和纯化，分装好后冷藏备用。

（2）收集和缓艾美耳球虫虫卵，进行孢子化。

（3）挑选体重差异小的2周龄雏鸡进行称重分组，然后进行首免。除红白对照组外的各组实验动物分别进行腿部肌肉注射免疫。

（4）一周后所有免疫组实验动物进行二次免疫，免疫内容与一免时相同。

（5）4周时对各组实验动物进行经口感染孢子化卵囊。

（6）5周龄时称重并剖杀所有动物，收集粪便。

（7）分析体重数据，粪便卵囊数和血清的细胞因子得出疫苗的免疫保护性。

4.可行性分析

（1）本实验与寄生虫实习时所做的抗虫药药效实验相似，实验可以顺利进行。

（2）已有的1A蛋白、过氧化物酶（PRX）和肌动蛋白解聚因子蛋白（ADF）的表达和构建的研究为本实验打下了基础。

4. 研究创新点

目前关于和缓艾美耳球虫的疫苗研究数量很少，对于球虫病的防治现在大多还在采用使用抗虫药的方法，但是大量注射抗球虫药会造成球虫的耐药性并会有药物残留问题，本实验运用重组DNA疫苗对雏鸡进行免疫，探索重组DNA疫苗对和缓艾美耳球虫的防治力，为今后的球虫防治提供了新的方向。

5. 研究计划与进展

（1）2017年9月-9月下旬，搜集相关资料，回顾专业知识。

（2）2017年10月上旬，按照实验计划进行蛋白表达，购买雏鸡并进行分组以及免疫。

（3）2017年10月下旬，对实验鸡进行攻虫。