猪流行性腹泻病毒YL112株的M基因序列分析及其在Vero细胞的传代适应性研究开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

课题意义 猪流行性腹泻（porcine epidemic diarrhea，ped）是由猪流行性腹泻病毒（porcine epidemic diarrhea virus，pedv）引起猪的一种高度接触性肠道传染病，以呕吐、水样腹泻、脱水和仔猪的高死亡率为特征[1, 2]。

各个阶段的猪群都会发病，尤其是 10 日龄以内的仔猪，死亡率高达100%。

近年来，ped 在我国呈高发趋势，给养猪业造成了巨大的经济损失[3, 4]。

2. 研究的基本内容和问题

研究目标对pedv yl112 株m基因进行分析，从基因角度阐明pedv yl112 株的分子遗传背景，并且通过体外细胞的适应性培养获得毒价稳定的毒株。

研究内容（1）vero细胞的核型分析（2）vero细胞的致癌，致畸性分析（3）扫描电镜下pedv yl112 株病毒形态学观察（4）pedv yl112 株的rna提取、对其m基因进行rt-pcr以及pcr产物回收测序（5）根据测序结果以及genbank中的pedv基因库，利用生物信息学软件进行比对，对pedv yl112 株m基因进行分析并建立系统进化树（6）利用vero细胞对pedv yl112 株进行适应性传代，获得毒价稳定的毒株。

拟解决的关键问题pedv的体外细胞适应一直是制约病原研究及疫苗开发的瓶颈，因为pedv与很多细胞共培养所产生的毒价并不高。

3. 研究的方法与方案

4. 研究创新点

本课题采用生物信息学软件对分离自广西猪场的PEDV YL112 株进行了形态学，分子生物学分析，并采用Vero细胞对其进行适应性传代，有望获得一株毒价较高且与地方流行性PEDV亲缘关系较近的弱毒株，为今后开展 PEDV的流行病学研究、病原学研究及疫苗的研制提供理论依据。

5. 研究计划与进展

2017.09-2017.10 PEDV YL112的形态学观察，Vero细胞核型、致癌致肿瘤试验检测2017.10-2017.11 PEDV YL112株RNA提取，RT-PCR以及PCR产物回收、测序2017.11-2018.1 PEDV YL112株与Vero细胞的适应性培养